转化生长因子β2真核表达载体pcDNA3.1(+)/TGF-β2的构建及其在骨髓基质细胞的表达

• 作者: 夏家辉 娄思权 王卫国 郑多
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 转化生长因子β2 TGFβ2 重组DNA 基因转染 骨髓基质细胞
• 年，卷（期）: 2003,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 19-23
• 页数: 5页
• 分类号: R784
• 字数: 4385字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-8982.2003.07.007

摘要

目的:构建人转化生长因子β2的真核表达载体pcDNA3.1(+)/TGF-β2,检测其转染骨髓基质细胞后的表达.方法:用PCR方法从人胎盘cDNA文库DNA中扩增TGF-β2全长cDNA,该基因片段两端设计了NheⅠ和XhoⅠ限制性酶切位点.将所得片段连接到T载体上测序证实.利用重组DNA技术将TGF-β2的cDNA构建到真核表达载体pcDNA3.1(+)上,酶切鉴定.通过脂质体介导的转染技术,将所构建的载体导入从骨髓中分离培养的基质细胞中,体外单层培养.分别于转染后24h和4周利用RT-PCR和Western-Blotting方法检测目的基因的表达情况.结果:经琼脂糖凝胶电泳及测序证实,PCR获得的片段与GenBank中登记的TGF-β2 cDNA序列完全相同.pcDNA3.1(+)/TGF-β2酶切片段的长度与理论大小相符.转染后不同时期的骨髓基质细胞在mRNA和蛋白质水平均可检测到TGF-β2的表达.结论:pcDNA3.1(+)/TGF-β2真核表达载体构建成功,在骨髓基质细胞内可获得短暂和长期表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王卫国	北京大学第三医院骨科	6	157	5.0	6.0
2	娄思权	北京大学第三医院骨科	57	839	15.0	27.0
3	郑多	中南大学中国医学遗传学国家重点实验室	10	74	6.0	8.0
4	夏家辉	中南大学中国医学遗传学国家重点实验室	40	368	11.0	17.0