摘要:
目的:研究骨髓基质细胞向成骨细胞分化过程中,雌二醇对其骨形态发生蛋白受体 (BMPR)Ⅰ A,Ⅰ B mRNA表达的影响,探讨雌二醇对成骨细胞生成的作用,试阐明绝经后高转换骨代谢始动环节的可能机制. 方法:SD大鼠骨髓基质细胞在生长培养基中传代培养后,用 1,25(OH)2D3和地塞米松( DEX)诱导骨髓基质细胞向成骨细胞分化, 17β-雌二醇( E2)处理培养细胞,观察 E2对骨髓基质细胞分化过程中骨形态发生蛋白受体Ⅰ A、Ⅰ B mRNA、碱性磷酸酶 (ALP)活性和Ⅰ型胶原合成的影响,β- actin作内对照半定量 RT- PCR分析骨形态发生蛋白受体Ⅰ A,Ⅰ B mRNA的表达,以α-磷酸奈酚为底物,测定细胞碱性磷酸酶的活性, Van Gieson染色法显示Ⅰ型胶原的含量. 结果:E2能明显抑制骨髓基质细胞分化过程中 BMPR-Ⅰ A mRNA的表达,且呈剂量依赖性,随 E2浓度增加( 0~ 1× 103 nmol/L) BMPR-Ⅰ A mRNA从 (27.0± 3.4)%降至 (17.0± 1.8)% ( t=5.2,P< 0.01)和 (9.3± 1.6)% (t=9.2,P< 0.01); BMPR-Ⅰ B mRNA随 E2浓度增加而增加,从 (2.0± 0.8)%增至 (4.8± 1.5)% ( t=3.3,P< 0.05)和 (17.2± 2.2)% (t=13,P< 0.01). Northern blot 结果显示在上述 E2浓度时 BMPR-Ⅰ A mRNA的表达从 4.21± 0.36降至 1.24± 0.10( t=18.2,P< 0.01); BMPR-Ⅰ B mRNA的表达从 1.72± 0.11增至 3.73± 0.31( t=12.2,P< 0.01). ALP活性随 E2浓度增加而降低,从 (42.6± 2.5)U/g蛋白降至 (17.9± 2.0)U/g蛋白 ( t=15,P< 0.01) ,(10.8± 1.5)U/g蛋白( t=22,P< 0.01)和 (3.6± 0.7)U/g蛋白( t=30,P< 0.01);细胞Ⅰ型胶原的含量随 E2浓度增加而减少, Van Gieson染色由鲜红、淡红到黄色,红色越深,表明胶原越多. 结论:E2能明显抑制骨髓基质细胞分化过程中 BMPR-Ⅰ A mRNA的表达,降低 ALP的活性和Ⅰ型胶原含量,增加 BMPR-Ⅰ B mRNA的表达).