人血管生成素-1和血管内皮生长因子VEGF165腺病毒载体构建

• 作者: 丁兆丰 丁必森 周磊 哈团柱 张馥敏 李传富 杨志建 陆丽 马文珠 高翔
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 血管生成因子 内皮生长因子 成纤维细胞生长因子,碱性 腺病毒科 重组,遗传
• 年，卷（期）: 2003,（3）
• 所属期刊栏目: 心肺康复
• 页码范围: 434-436，530
• 页数: 4页
• 分类号: R541
• 字数: 6567字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2003.03.058

摘要

目的:克隆人血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor165,VEGF165)和血管生成素-1(angiopoiettin-1)的全长编码基因,构建表达该基因的复制缺陷型腺病毒载体Ad-Ang1和Ad-VEGF165.方法:通过RT-PCR方法克隆人VEGF165和Ang1全长编码基因.Ad-VEGF165和Ad-Ang1通过同源重组方法构建.将Ad-VEGF165和/或Ad-Ang1转染大鼠胚胎心脏成肌细胞(H9C2)24 h后,Western blot方法分析VEGF165和Ang1蛋白表达量;核酸电泳分析细胞基因组降解检测凋亡水平.结果:测序显示VEGF165序列与基因库序列相同;Ang1序列与基因库序列存在一个碱基的差异,但编码氨基酸无改变.VEGF165和Ang1蛋白表达分别为对照组的11.65倍和3.53倍.Ad-VEGF165和/或Ad-Ang1转染后的H9C2细胞对过氧化氢诱导的细胞凋亡具有明显的抵抗能力.结论:所构建的Ad-Ang1和Ad-VEGF165能有效转染心脏成肌细胞,表达出功能性目的蛋白,具有抗细胞凋亡作用.