人胰蛋白酶原-2在大肠杆菌中的表达、纯化与活性测定

• 作者: 朱乃硕 欧西军 涂艳
• 来源期刊: 复旦学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 胰蛋白酶原-2 急性胰腺炎 原核表达
• 年，卷（期）: 2004,（6）
• 页码范围: 1067-1072,1078
• 页数: 7页
• 分类号: Q786
• 字数: 4613字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0427-7104.2004.06.020

摘要

胰蛋白酶原-2是急性胰腺炎相关的敏感而特异的标志物,并且与多种肿瘤转移的过程密切相关.对胰蛋白酶原-2基因5＇端4个氨基酸的密码子碱基进行简并突变,并在其3＇端连接6个组氨酸编码序列构建含重组质粒pBVTg2的大肠杆菌工程菌─pBVTg2/DH5α.重组大肠杆菌经温度诱导后获得了高效表达,重组蛋白占总菌体蛋白的20%,并以包涵体形式存在.包涵体经尿素缓冲液裂解后,通过Ni-NTA亲和树脂一步分离纯化. 纯化蛋白经SDS-PAGE分析及利用anti-histidine mAb进行Western blotting分析,以及蛋白N末端测序分析,结果表明与目的蛋白特征相符合.纯化的重组人胰蛋白酶原-2经复性后能与天然人胰蛋白酶原-2的单抗anti-hTrypsinogen2 mAb特异结合,复性后的蛋白在肠激酶作用后测得具有74 BAEE U/mg的胰蛋白酶比活力,为进行胰蛋白酶原-2单克隆抗体的制备及其检测和应用奠定了基础.