大鼠胚胎神经干细胞的纯化、诱导分化及鉴定

• 作者: 刘利君 刘文英 刘福云 师红 胡廷泽
• 来源期刊: 生物医学工程学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 神经干细胞 纯化 诱导分化 饲养层
• 年，卷（期）: 2004,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 591-596
• 页数: 6页
• 分类号: R3
• 字数: 4853字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1001-5515.2004.04.017

摘要

探讨胚胎神经干细胞(Neural stem cell, NSCs)的体外纯化扩增、保存标记、诱导分化及其鉴定方法.将14.5 d胎龄大鼠大脑额叶皮质NSCs在无血清DMEM/F12(含20 ng/ml bFGF, 20 ng/ml EGF及B27辅助培养液)培养,利用有限稀释法将悬浮生长的单个细胞所形成的克隆球挑选出来、通过亚克隆连续传代大量扩增而纯化,免疫组化鉴定nestin抗原阳性;选取部分NSCs冻存、复苏后nestin抗原阳性;用BrdU孵育NSCs,被BrdU标记的NSCs及其血清诱导分化后仍均呈BrdU阳性.用血清或饲养层诱导NSCs分化为大量表达Tubulin-Ⅲ(神经元特异性抗原微管蛋白3)阳性的神经元和GFAP(神经胶质纤维酸性蛋白)阳性的神经胶质细胞.由该实验可知有限稀释单细胞克隆连续传代是分离纯化、大量扩增胚胎期大脑NSCs的简单有效方法.饲养层细胞也能诱导NSCs分化为神经细胞.BrdU可标记、示踪神经系统疾病动物模型NSCs的实验治疗.掌握NSCs的体外纯化培养、保存标记、诱导分化及鉴定方法可为进一步研究NSCs的生物学特性及神经系统疾病的治疗提供新方法.