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摘要:
蜕皮调节转录因子(hormone receptor 3,HR3)在昆虫蜕皮过程中启动蜕皮相关早期基因簇表达,并抑制蜕皮相关晚期基因簇表达,对昆虫蜕皮级联反应起着关键的调控作用.利用合成的特异性引物通过RT-PCR扩增了棉铃虫Helicoverpa armigera蜕皮调节转录因子(HHR3),并与pGEX-4T-1载体连接,在大肠杆菌Escherichia coli DH5α内进行扩增,经过PCR筛选获得了HHR3-pGEX-4T-1重组质粒.用该质粒转化大肠杆菌表达菌株BL21并进行诱导表达,获得了与谷胱甘肽-S转移酶(GST)融合表达的HHR3包涵体,分子量在94 kD左右,通过无离子去垢剂CAPS(3-[cyclohexylamino]-1-propanesulfonic acid)变性、复性后获得了可溶性GST-HHR3融合蛋白,经凝血酶裂解和SDS-PAGE分离得到纯化的HHR3,经蛋白质N-端测序确认表达正确.用重组表达的HHR3免疫家兔,制备了兔抗HHR3多克隆抗体,免疫印迹检测显示该抗体对HHR3有特异性识别能力,可以用于HHR3功能与调控等下游研究.免疫印迹检测结果还表明,HHR3在5龄向6龄蜕皮的幼虫脂肪体中高表达,在进入6龄24 h的幼虫脂肪体中含量明显下降,在6龄72 h的幼虫中肠中没有检测到HHR3表达;成虫卵巢中有HHR3表达.
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文献信息
篇名 棉铃虫蜕皮调节转录因子在大肠杆菌中的重组表达及其包涵体纯化
来源期刊 昆虫学报 学科 生物学
关键词 棉铃虫 蜕皮调节转录因子 重组表达 包涵体纯化 抗体制备
年,卷(期) 2004,(3) 所属期刊栏目 生理与生化
研究方向 页码范围 281-286
页数 6页 分类号 Q966
字数 5035字 语种 中文
DOI 10.3321/j.issn:0454-6296.2004.03.001
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 赵小凡 山东大学生命科学学院 50 618 13.0 24.0
2 王金星 山东大学生命科学学院 53 698 15.0 25.0
3 刘延荷 山东大学生命科学学院 2 17 2.0 2.0
4 蒋晓娟 山东大学生命科学学院 1 12 1.0 1.0
5 徐筠娉 山东大学生命科学学院 1 12 1.0 1.0
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研究主题发展历程
节点文献
棉铃虫
蜕皮调节转录因子
重组表达
包涵体纯化
抗体制备
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
昆虫学报
月刊
0454-6296
11-1832/Q
16开
北京市朝阳区北辰西路1号院5号中国科学院动物研究所
1950
chi
出版文献量(篇)
3602
总下载数(次)
9
总被引数(次)
49239
相关基金
国家自然科学基金
英文译名:the National Natural Science Foundation of China
官方网址:http://www.nsfc.gov.cn/
项目类型:青年科学基金项目(面上项目)
学科类型:数理科学
国家高技术研究发展计划(863计划)
英文译名:The National High Technology Research and Development Program of China
官方网址:http://www.863.org.cn
项目类型:重点项目
学科类型:信息技术
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