东方田鼠骨髓基因池的构建及抗日本血吸虫抗性相关基因的筛选

• 作者: 吴驰 申群喜 秦志强 胡维新 许冰 邬国军 龚强
• 来源期刊: 生命科学研究
• 学科: 生物学
• 关键词: 东方田鼠 基因池 表达克隆法 日本血吸虫 抗性相关基因
• 年，卷（期）: 2004,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 333-338
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 字数: 4976字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-7847.2004.04.008

摘要

利用表达克隆法,从东方田鼠骨髓细胞中克隆出抗日本血吸虫抗性相关基因.首先提取高质量的mRNA,逆转录成cDNA,将cDNA与哺乳动物细胞瞬时表达载体pcDNA1.1/Amp连接,建立表达cDNA文库;将cDNA文库分成A-H 8个基因池,转染HEK293细胞,48 h后收集培养上清,获得奈件培养基.将条件培养基与日本血吸虫童虫一起培养,观察杀虫效应,取对童虫抑制作用最强的基因池E再分成8个亚基因池E1-8,分别转染HEK293细胞,并将条件培养基与血吸虫童虫一起培养,获得具有明显抑制血吸虫童虫活性的亚基因池E77,按上述方法反复进行筛选,直到获得有抑制作用的单个克隆,该技术的建立为克隆东方田鼠抗日本血吸虫抗性相关基因以及研究其作用机制奠定基础.