一种人胰岛素类似物的制备、鉴定与活性研究

• 作者: 怀文辉 茹炳根 袁华 赵锐
• 来源期刊: 生物化学与生物物理进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 胰岛素类似物 单体胰岛素 原核表达 生物学活性
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 59-64
• 页数: 6页
• 分类号: Q816
• 字数: 4099字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3282.2004.01.008

摘要

采用PCR方法,将人胰岛素分子B链B10位His突变为Glu,在B25和B26位之间插入Glu,构建了[B10 Glu,B25-Glu-B26]胰岛素原融合蛋白基因.利用通用型质粒pBV220构建表达载体,在大肠杆菌DH5α中表达,表达蛋白为包含体形式,约占菌体总蛋白的20%～30%.经过复性、凝胶过滤等步骤得到胰岛素原融合蛋白.用胰蛋白酶和羧肽酶B酶切,经过DEAE离子交换和RP-HPLC纯化得到胰岛素突变体类似物,并经过质谱测定鉴定.凝胶过滤法测定了蛋白质分子自身的缔合性质,圆二色谱(CD)测定了构象的变化.并分别测定了放免活性、受体结合活性及小白鼠低血糖惊厥实验.结果表明,突变体分子缔合性明显下降.放免活性和受体结合活性分别约为标准胰岛素的63.5%和114.4%, 整体活力略高于天然胰岛素.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	茹炳根	北京大学生命科学学院蛋白质工程国家重点实验室	102	1233	20.0	29.0
2	怀文辉	北京大学生命科学学院蛋白质工程国家重点实验室	3	10	3.0	3.0
3	赵锐	北京大学生命科学学院蛋白质工程国家重点实验室	5	17	2.0	4.0
4	袁华	北京大学生命科学学院蛋白质工程国家重点实验室	2	32	2.0	2.0