人促性腺激素释放激素及其转运肽基因的克隆、表达与纯化

• 作者: 李景鹏 李璐 金元昌
• 来源期刊: 东北农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 促性腺激素释放激素 转运肽 基因克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2004,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 427-431
• 页数: 5页
• 分类号: Q785|S852.21
• 字数: 3647字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-9369.2004.04.009

摘要

研究根据GenBank中已发表的人GnRH2基因mRNA序列以及转运肽基因核苷酸序列,借助Oligo4.1设计了一对寡核苷酸引物,以引物3′末端的短互补序列退火形成小段双链,从而互为模板和引物,通过引导合成长达90bp的目的序列GnRH/TRS.将其克隆到pMD18-T载体上,构建重组质粒pYC1,经酶切鉴定筛选出阳性克隆pYC1,进一步的序列分析确认其中GnRH/TRS序列的正确性.pYC1经BamHI和Ec0RI酶切得到GnRH/TRS片段,然后将此片段克隆到表达载体pGEX-6p-1上,构建重组质粒pYC2.经酶切鉴定筛选出阳性克隆pYC2,并转化到大肠杆菌BL21(ED3)plyS实现原核表达.IPTC诱导后成功表达出与预期大小相符的约28 ku的融合蛋白,光密度扫描对表达产物进行初步定量,表达产物约占菌体总蛋白的33.3%,表达产物经Glutathione Sepharose4B层析纯化后,得到了纯度较高的GST-GnRH/TRS融合蛋白,为进一步科研和实际应用奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李景鹏	东北农业大学生命科学学院	96	990	17.0	28.0
2	金元昌	东北农业大学生命科学学院	5	204	3.0	5.0
3	李璐	东北农业大学生命科学学院	31	136	6.0	11.0