大熊猫和小熊猫粪便DNA提取的简易方法

• 作者: 吕晓平 张保卫 李明 魏辅文
• 来源期刊: 动物学报
• 关键词: 大熊猫 小熊猫 粪便 DNA 抽提 新方法
• 年，卷（期）: 2004,（3）
• 所属期刊栏目: 方法和观点
• 页码范围: 452-458
• 页数: 7页
• 字数: 5584字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-5507.2004.03.021

摘要

采集了大熊猫和小熊猫的新鲜粪便样品,使用100%乙醇保存.通过重复离心富集研究动物的肠道脱落细胞,并使用乙醇和双蒸水洗涤以除去抑制物.用1%的SDS快速裂解细胞,离心除去残渣后,向裂解液中加入蛋白酶进行消化.消化结束后使用等体积的酚/氯仿抽提,乙醇沉淀DNA.用双蒸水溶解粪便DNA后,使用PCR产物纯化试剂盒对粪便DNA进行纯化.电泳检测结果显示,从乙醇保存的大、小熊猫粪便样品中抽提到高质量的粪便DNA.对线粒体控制区、细胞色素b基因、12 S rRNA基因的PCR扩增反应以及测序结果也证实了样品保存方法和DNA抽提方法可靠而高效.此方法使用实验室内常用的分子生物学试剂,不仅克服了分子粪便学研究中常见的抑制物粪便DNA微量降解严重等障碍,与商业化的粪便抽提试剂盒(QIAamp DNA Stool MiniKit,Qiagen)相比还是一种经济的试验方法(抽提反应成本为试剂盒的1/5).文中还对粪便DNA内细菌基因组等背景DNA可能对分子粪便学试验结果的影响进行了探讨.在基于PCR技术的遗传学研究中,对于植食性动物而言,粪便内的背景DNA对目标动物DNA片断的扩增和序列测定未见影响;但对于肉食性动物,则必须考虑被捕食者基因组对试验可能产生的影响,应谨慎对待[动物学报50(3):452-458,2004].

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	魏辅文	中国科学院动物研究所	85	2146	24.0	44.0
2	李明	中国科学院动物研究所	251	3222	29.0	47.0
3	吕晓平	中国科学院动物研究所	2	103	2.0	2.0
4	张保卫	中国科学院动物研究所	6	192	6.0	6.0