hHO-1结构预测及突变体的构建、表达、纯化和活性测

• 作者: 俞善昌 周文普 夏振炜 崔文俊 张雪洪 李云珠 申庆祥
• 来源期刊: 实验生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 血红素加氧酶-1 突变体 结构 活性
• 年，卷（期）: 2004,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 375-383
• 页数: 9页
• 分类号: Q5
• 字数: 5596字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-520X.2004.05.006

摘要

人血红素加氧酶-1(human heme oxygenase-1,hHO-1)是血红素代谢的限速酶,直接调节体内胆红素水平.利用软件Spdbv程序对hHO-1进行结构模拟预测,以Ala取代第25位His残基,hHO-1活性部位的结构有较明显的改变,但据模拟推测突变后hHO-1与血红素仍然具有结合性.依据模拟结果,构建野生型和突变体表达载体pBHO-1和pBHO-1(M),并分别转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达目的蛋白.表达产物经30%-60%(NH4)2SO4盐析后纯度提高3.6倍,再经两次Q-Sepharose Fast Flow阴离子交换树脂分离则表达产物的纯度提高30倍.酶活性测定显示,突变体hHO-1(△hHO-1)较野生型hHO-1(whHO-1)活性下降了91.21%.本研究显示hHO-1的第25位His在酶与底物血红素氧化反应中起着重要作用,为有效调控酶活性发挥其生物学作用提供依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张雪洪	上海交通大学生命科学技术学院	77	506	13.0	19.0
2	李云珠		43	399	10.0	19.0
3	申庆祥		22	67	5.0	7.0
4	夏振炜		16	183	7.0	13.0
5	俞善昌		39	316	10.0	16.0
6	崔文俊	上海交通大学生命科学技术学院	3	20	1.0	3.0
7	周文普	上海交通大学生命科学技术学院	3	2	1.0	1.0