汉坦病毒疫苗株Z10与Z37重组核蛋白NP的表达纯化及其特异结合基因组末端反向重复序列的功能研究

• 作者: 刘克洲 刘合宾 朱智勇 翁景清
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 医学
• 关键词: 汉坦病毒 核蛋白(NP) 反向重复序列 凝胶电泳迁移改变实验(EMSA)
• 年，卷（期）: 2004,（2）
• 所属期刊栏目: 人与动物病毒
• 页码范围: 110-117
• 页数: 8页
• 分类号: R373.32|Q78
• 字数: 5070字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-8721.2004.02.003

摘要

汉坦病毒是引起肾综合征出血热(HFRS)和汉坦病毒型肺炎综合征(HPS)的主要病原体.其基因组由三节段的单股负链RNA组成,即S、M与L基因片段.汉坦病毒基因组的一个重要特点是每个基因片段的两个末端都有一段长18个核苷酸的高度保守的反向重复序列,互补可形成双链发夹结构,并且这一特点为不同型病毒所共有.为了研究该基因组末端保守的反向重复序列的功能,首先构建了汉坦病毒中国疫苗株Z10(汉滩型)及Z37(汉城型)的核蛋白原核表达载体,并在大肠杆菌中高效表达.经NI-NAT亲和柱和HiPrep16/10 DEAE离子交换柱液相色谱(FPLC)二步提纯,获得高纯度的重组核蛋白,并分别以胰蛋白酶消化后,用Western blotting进行区分和鉴定.以T4 DNA激酶同位素标记一对人工合成互补的18个核苷酸反向重复序列,制备双链探针.然后将该探针与纯化的Z10、Z37株的核蛋白NP进行非变性凝胶电泳迁移改变实验(EMSA)后发现,重组的Z10、Z37株的核蛋白NP,在体外均可特异地结合其基因组末端反向重复序列形成的双链探针.该结果表明,汉坦病毒基因组末端的反向重复序列是核蛋白重要结合位点,这对理解汉坦病毒核蛋白功能以及病毒复制过程中病毒粒子的包装机制有重要的意义.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘克洲	浙江大学医学院附一医院传染病研究所	66	345	10.0	16.0
2	翁景清	浙江省疾病预防控制中心肾综合征出血热重点实验室	50	254	9.0	13.0
3	朱智勇	浙江省疾病预防控制中心肾综合征出血热重点实验室	51	171	7.0	9.0
4	刘合宾	浙江大学医学院附一医院传染病研究所	4	24	3.0	4.0