短双链RNA对鸡胚盘细胞外源绿荧光蛋白基因表达的影响

• 作者: 孟和 崔芳岩 潘玉春 王起山 陈学辉
• 来源期刊: 动物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: RNAi siRNA 鸡胚盘细胞 GFP GAPDH
• 年，卷（期）: 2004,（2）
• 所属期刊栏目: 方法和观点
• 页码范围: 302-307
• 页数: 6页
• 分类号: Q95
• 字数: 4864字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-5507.2004.02.022

摘要

RNA干扰(RNA interference,RNAi)作为一种特异性沉默基因表达的方法,正在成为研究基因功能、胚胎发育及病毒性疾病治疗的重要工具.为了了解RNA干扰在禽类中的作用情况,实验将体外转录合成的绿荧光蛋白短双链干扰RNA(siGFP)和3-磷酸甘油醛脱氢酶短双链干扰RNA(siGAPDH)分别同绿荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)表达载体(pEGFP-CI Vector)用脂质体转染试剂LipofectamineTM 2000共转染鸡胚盘细胞,并于转染后36 h在荧光显微镜下观察转染和干扰效果.对细胞绿荧光蛋白表达率的方差分析结果显示,不同处理组间差异达极显著水准,其中GFP组和GFP+siGAPDH组均同GFP+siGFP组差异极显著,GFP组同GFP+siGAPDH组差异不显著.实验结果说明,siGFP能特异、有效地敲低细胞绿荧光蛋白的表达.同线虫、真菌、拟南芥、水螅、锥虫、涡虫、果蝇、斑马鱼、小鼠等其它生物体一样,鸡胚盘细胞中也存在短双链下扰RNA(siRNA)特异性沉默基因表达的RNA干扰机制[动物学报50(2):302-307,2004].