重组人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体的工业化制备与性质研究

• 作者: 丁楅森 刘建宁 刘莉莉 孙自勇 张菁 朱镇华 杨庆 王石泉 陈于红 陈新园
• 来源期刊: 南京大学学报(自然科学版)
• 学科: 生物学
• 关键词: 重组人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体(K2tPA),发酵,活化,纯化
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 蛋白质多肽药物制造与临床前研究专栏
• 页码范围: 7-15
• 页数: 9页
• 分类号: Q78
• 字数: 4025字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0469-5097.2004.01.002

摘要

将含有人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体(K2tPA)重组表达质粒的工程菌经10 L种子罐培养及100 L发酵,IPTG诱导表达,其表达量为占菌体总蛋白的20%,表达产物经体外变复性、TI-Sepharose亲和层析、SP-Sepharose离子交换层析,每100 L发酵液得重组人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体(K2tPA)纯品4 g,纯度达95%以上,比活大于500 000 IU/mg,内毒素及热源含量、宿主蛋白残留量、宿主DNA残留量等均达到临床使用标准.其分子量(质谱测定)、氨基酸组成、N、C-端氨基酸序列分析等均与理论值相符.同时进行了等电点测定及肽图分析等性质研究.