流式细胞术检测胱氡肽酶3原位激活与两种检测细胞凋亡方法的比较性研究

• 作者: 余源 冯永东 吴剑宏 李小兰 肖薇 胡俊波 谢大兴 钟以胜 陶德定 龚建平
• 来源期刊: 中华检验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 细胞凋亡 流式细胞术 胱氡肽酶3
• 年，卷（期）: 2004,（9）
• 所属期刊栏目: 基础实验诊断研究
• 页码范围: 582-585
• 页数: 4页
• 分类号: R4
• 字数: 2922字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:1009-9158.2004.09.017

摘要

目的用一种新的荧光染色技术(FLICA/PI)检测放射诱导T淋巴细胞白血病细胞(MOLT-4)的细胞凋亡过程中胱氡肽酶 3(Caspase 3)原位激活及探讨其活性变化特点,并与亚G1峰和膜联蛋白 V/碘化丙啶(Annexin V/PI)检测细胞凋亡方法的灵敏度进行比较性评价.方法以放射诱导的MOLT-4细胞凋亡为模型,用荧光标记的Caspase 3抑制剂(FLICA)标记原位激活的Caspase 3,然后,用流式细胞仪定量检测并分析其活性变化;同时,用亚G1峰法和Annexin V/PI检测细胞凋亡.结果 FLICA/PI检测到的Caspase 3激活,在照射后2 h开始升高(5.84%),而Annexin V/PI在4 h时检测到的凋亡率为5.35%,FLICA/PI比Annexin V/PI可提前2 h检测到细胞凋亡,Caspase 3活性的出现早于细胞膜反转.FLICA阳性率在照射后4 h暴发性增高至12.39%,显示有时间效应.两种检测方法均比亚G1峰法敏感, 但Annexin V/PI检测的凋亡率低于FLICA/PI法.结论 X-射线能诱导MOLT-4细胞凋亡,并有明显的时间效应关系;Caspase 3激活有阈值效应,是照射后细胞发生凋亡过程中早于形态学变化的检测指标.用Caspase 3活性检测细胞凋亡更直接,更敏感.