人胰腺癌抑制消减cDNA文库的构建

• 作者: 屠振兴 李兆申 蒋业贵 金晶 龚燕芳
• 来源期刊: 胰腺病学
• 关键词: 胰腺癌 抑制消减杂交 cDNA文库
• 年，卷（期）: 2004,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 213-217
• 页数: 5页
• 字数: 4837字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2004.04.007

摘要

目的应用抑制消减杂交技术(SSH)构建胰腺癌和正常胰腺组织间差异表达的抑制消减cDNA文库.方法分别提取胰腺癌(tester)和癌旁正常胰腺组织(driver)中的总RNA和mRNA,合成双链cDNA,经Rsa Ⅰ酶切后,将胰腺癌双链cDNA分为两组,分别加上不同的接头,再与正常胰腺组织cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,分离出胰腺癌差异表达基因的cDNA片段.将该差异表达片段克隆至T/A载体,并转化大肠杆菌TOP 10F',经蓝白斑筛选后,再用PCR方法筛选阳性克隆,从而构建胰腺癌抑制消减cDNA文库.结果文库扩增后得到257个白色克隆,随机挑取50个阳性克隆进行PCR扩增分析,其中47个克隆有插入片段,克隆阳性率为94%,片段大小主要集中在300～600bp之间.结论成功构建了人胰腺癌抑制消减cDNA文库,为进一步筛选、克隆胰腺癌特异性表达基因奠定了基础.