人端粒结合因子在端粒酶阳性和阴性细胞中的定位与周期性表达的研究

• 作者: 余建 孙洁 施继敏 朱园园 李静远 来晓瑜 林茂芳 蓝建平 谭亚敏 黄河
• 来源期刊: 浙江大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 端粒 端粒结合因子 基因,TRF1 细胞周期 表达
• 年，卷（期）: 2004,（6）
• 所属期刊栏目: 专题报道
• 页码范围: 475-480,495
• 页数: 7页
• 分类号: R394.3
• 字数: 4499字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2004.06.002

摘要

目的:研究人端粒结合因子1(telomere repeat binding factor 1,TRF1)在端粒酶阳性和阴性细胞中的定位以及在细胞周期中的表达.方法:应用分子克隆技术扩增TRF1基因全长(TRF1FL)和N、C端缺失突变体(TRF1ΔNC)序列,并克隆入pEGFP-C2真核表达载体,表达绿色荧光(GFP)融合蛋白;将含目的基因质粒转染端粒酶阳性Hela细胞和端粒酶阴性WI38-2RA细胞,Western Blot验证目的蛋白分子量,荧光显微镜观察TRF1在间期细胞和染色体的定位;利用药物阻断HeLa细胞于不同周期,流式细胞仪检测细胞周期,半定量Western Blot检测TRF1在不同细胞周期中的表达.结果:TRF1FL、TRF1ΔNC序列长度分别为1.3 kb和0.9 kb;GFP融合TRF1FL、TRF1ΔNC分子量大小分别为80 kD和60 kD.TRF1FL在间期细胞胞核内呈点状表达,在染色体则表达于染色体未端,TRF1ΔNC在细胞核内呈弥散性表达;TRF1在端粒酶阴性细胞中与早幼粒细胞白血病小体(promyelocytic leukemia body,PML)共定位,在端粒阳性细胞中则没有共定位.TRF1在HeLa细胞中以M期表达量最高,G1/S表达最低,M期表达量是G1/S期的3.9倍(t=12.92,P<0.01).结论:TRF1在端粒酶阳性和阴性细胞中有不同的定位模式,在HeLa细胞中TRF1呈周期性表达.