利用Cre/lox重组系统在转基因动物中筛选高效表达外源基因的"友好"基因座

• 作者: 任立明 候健 关宏 安晓荣 桑璐 郭英 陈永福
• 来源期刊: 高技术通讯
• 关键词: loxP lox511 Cre重组酶 友好基因座 高效表达
• 年，卷（期）: 2004,（12）
• 所属期刊栏目: 生物与现代农业技术
• 页码范围: 43-49
• 页数: 7页
• 字数: 5946字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1002-0470.2004.12.010

摘要

本实验的目的是利用Cre/lox重组系统进行"友好"基因座的筛选,即利用一个两端带有lox位点的标记基因去转染动物细胞或生产转基因动物,获得可以高效表达外源基因的"友好"基因座.一旦筛选到好的基因座,就建成了一个可以在动物体稳定地高效表达外源基因的技术平台.为此,利用野生型loxP位点和含有一个点突变的lox511位点分别构建两个载体pSL-loxGFP和pSL-loxIFN.首先将含有GFP和新霉素基因的质粒pSL-loxGFP DNA转染牛胎儿成纤维细胞,并用G418筛选,挑选出发绿色荧光的细胞克隆.经增殖培养之后,再将含有鸡γ-干扰素基因的质粒pSL-loxIFN和含有Cre重组酶基因的质粒pBS185 DNA共转染发荧光的细胞克隆,筛选出发生重组后不再发光的细胞克隆.用PCR法检测了两个不发荧光的细胞克隆及发荧光的细胞克隆,并使用质粒pSL-loxIFN、质粒pSL-loxGFP及牛基因组作为对照.检测结果显示,在Cre重组酶的作用下,两个不发荧光的细胞克隆中,一个发生了基因置换,另一个发生了基因删除.以上实验表明,巧妙地用Cre/lox重组系统,可以构建一套使外源基因在动物体内定点地高效表达的技术体系.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	任立明	中国农业大学生物学院农业生物技术国家重点实验室	15	87	6.0	8.0
2	安晓荣	中国农业大学生物学院农业生物技术国家重点实验室	40	302	10.0	16.0
3	关宏	中国农业大学生物学院农业生物技术国家重点实验室	12	58	4.0	7.0
4	郭英	中国农业大学生物学院农业生物技术国家重点实验室	13	75	5.0	8.0
5	桑璐	中国农业大学生物学院农业生物技术国家重点实验室	2	9	2.0	2.0
6	候健	中国农业大学生物学院农业生物技术国家重点实验室	1	6	1.0	1.0