一种改进的大鼠肝星状细胞分离方法

• 作者: 杨冬华 沈雁 舒建昌 赵景润 钟灿灿
• 来源期刊: 中华肝脏病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝星状细胞 库普弗细胞 二氯亚甲基二磷酸盐 细胞分离
• 年，卷（期）: 2004,（6）
• 所属期刊栏目: 其他肝病
• 页码范围: 353-355
• 页数: 3页
• 分类号: R5
• 字数: 2515字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:1007-3418.2004.06.012

摘要

目的改进大鼠肝星状细胞的分离方法,提高肝星状细胞分离的纯度和活力.方法 SD大鼠在静脉注射1 m1含二氯亚甲基二磷酸盐的脂质体3d后,用含100U/ml肝素的D-H anks液灌注肝脏l0～l5min,改用含0.05%胶原酶溶液的D-Hanks液灌注25～30min,将肝脏细胞悬液置于0.025%胶原酶、0.005%DNase Ⅰ的溶液中振荡消化30 min,细胞悬液过200目筛网,50×g离心2 min去除肝细胞,300×g离心10 min得到肝脏非实质细胞沉淀,将细胞悬浮于Nycodenz使终浓度为11.5%,1400×g离心17mmin,吸取Nycodenz上层的细胞即为肝星状细胞.台盼蓝拒染实验鉴定细胞活力,自发荧光、D esmin免疫细胞化学染色鉴定细胞纯度,内源性过氧化物酶染色检测库普弗细胞.结果肝星状细胞得率每只大鼠约3×107个,细胞活力在95%以上,初分离的肝星状细胞在328 nm激发光下自发蓝绿色荧光,De smin免疫细胞化学染色鉴定纯度达到90%,未检测到内源性过氧化物酶阳性细胞.结论建立了一种无库普弗细胞混杂的大鼠肝星状细胞分离方法,可以用于原代肝星状细胞的生物学行为的研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨冬华		108	432	10.0	15.0