人绒毛膜促性腺激素β亚基单一B_细胞表位(β5、β9或β8) 融合蛋白的表达和纯化

• 作者: 何亚萍 何远 孙志达 季朝能 应康 徐万祥 王丽婷 谢毅 陈金中 顾少华
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 医学
• 关键词: hCGβ亚基 线性表位 链霉亲和素 融合表达 免疫印迹 纯化
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 基因工程
• 页码范围: 49-53
• 页数: 5页
• 分类号: R392.11
• 字数: 4034字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2004.01.011

摘要

作为开发新型实用性人绒毛膜促性腺激素(hCG)疫苗的一种尝试, 我们已构建若干组合靶抗原三个线性B- 细胞表位和外源强T- 细胞表位的基因工程hCG嵌合肽.为了检测用这些嵌合肽免疫的动物血清中是否能产生抗各表位的三种抗体,本研究选用能在大肠杆菌中高表达和与生物素亲和性强且特异(方便通过亲和层析纯化)的链霉亲和素为载体,分别构建了三种含β-hCG不同单一线性B-细胞表位(β5, β9和β8)的融合蛋白.在链霉亲和素基因下游多克隆区EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ位点插入各表位编码基因片段(带TAA终止密码子)的pTSA-18重组质粒, 转化BL21(DE3)pLysS宿主菌后, 它们在IPTG诱导下均能以较高水平表达各自目的融合蛋白,而且它们的表达产物在Western blot鉴定中都能被抗各表位特异的多抗或单抗或抗报告表位单抗识别.用改良的制备性PAGE方法可以一步纯化电泳均一性高于95%的三个融合蛋白, 它们的收得率相对1L培养物约为5 mg.作为化学合成表位肽的替代物, β-hCG三个单一B- 细胞表位融合蛋白的可获得性将有助于所构建hCG基因工程嵌合肽以及其他hCG疫苗,也包括它的DNA疫苗的免疫原性分析.