猕猴桃基因组DNA文库的构建

• 作者: 张上隆 徐昌杰 许文平 陈昆松
• 来源期刊: 果树学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猕猴桃 基因组DNA文库 PCR
• 年，卷（期）: 2004,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 204-207
• 页数: 4页
• 分类号: S663.4
• 字数: 3613字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-9980.2004.03.004

摘要

采用改良CTAB法提取美味猕猴桃(Actinidia deliciosa cv.Bruno)基因组DNA,经CsCl密度梯度离心纯化后用Sau3AI部分酶切,通过透析袋电泳的方法分级回收,剔除14kb以下的片段,回收长为14～23kb的酶切片段.部分酶切片段经dATP和dGTP部分补平后与Lambda FIX(R)Ⅱ载体连接,连接产物用GigapacK(R)ⅢPackaging Extract进行包装,最后得到含有1.05×106pfu的基因组文库,扩增后文库滴度为2.5×1pfu/mL.利用6对根据植物基因保守区或猕猴桃基因序列设计的专一引物对基因组文库和基因组DNA进行PCR扩增,均得到与预计长度相符的目的基因片段.