青蒿过氧化物酶的克隆及其在体外对青蒿素生物合成的影响

• 作者: 刘本叶 叶和春 李国凤 李振秋 王红 章焰生 韩军丽
• 来源期刊: 植物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 青蒿 青蒿酸 青蒿素 过氧化物酶
• 年，卷（期）: 2004,（11）
• 所属期刊栏目: 分子与发育生物学
• 页码范围: 1338-1346
• 页数: 9页
• 分类号: Q946.8
• 字数: 845字
• 语种: 英文
• DOI: 10.3321/j.issn:1672-9072.2004.11.011

摘要

用RACE方法从青蒿(Artemisia annua L.)高产株系001中克隆了一个过氧化物酶.将此基因在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS细胞中进行原核表达得到重组蛋白(APOD1),表达的蛋白分别以抗坏血酸、愈创木酚为底物进行过氧化反应,结果显示,APOD1催化愈创木酚的活力是抗坏血酸的1.8倍左右,由此表明,克隆的APOD1类属于植物经典过氧化物酶(第三大类过氧化物酶).经与其他植物过氧化物酶同源性比较分析,推测APOD1的氨基酸序列与白羽扇豆(Lupinus albus)、辣根菜(Armoracia rusticana)、小麦(Triticum aestivum)、烟草(Nicotiana tabacum)和蕃茄(Lycopersicon esculentum)的一致性分别为42.0%、36.2%、38.9%、33.6%和32.8%.Northern杂交分析表明,此基因在青蒿的根、茎和叶中均有表达.加入APOD1至青蒿细胞提取液有利于青蒿酸向青蒿素的生物转化,但APOD1并不能直接以青蒿酸作为氧化底物.