人I型丙氨酸氨基转移酶的可溶性表达及抗血清反应模式

• 作者: 兰风华 朱忠勇 涂向东 谢飞
• 来源期刊: 中华检验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 丙氨酸氨基转移酶 克隆,分子
• 年，卷（期）: 2004,（12）
• 所属期刊栏目: 基础实验诊断研究
• 页码范围: 857-860
• 页数: 4页
• 分类号: R4
• 字数: 3491字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:1009-9158.2004.12.017

摘要

目的克隆表达重组人I型丙氨酸氨基转移酶(ALT1)蛋白及制备抗血清,探讨建立ALT1特异性检测方法思路.方法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增人ALT1 cDNA,插入pGEX-2T,构建原核表达载体pGEX-2T-ALT1,并转入大肠杆菌进行表达.SDS-PAGE,活力测定和活性染色鉴定表达产物.表达产物免疫小鼠所得抗血清对天然ALT1, 重组ALT1及重组ALT2进行Western blot分析.结果重组质粒测序和酶切结果显示ALT1基因已经成功克隆到pGEX-2T载体.SDS-PAGE和活性染色表明所表达蛋白具有天然活性.抗ALT1血清除识别重组ALT1外,还可识别天然蛋白和重组ALT2. 结论重组人ALT1得到高效可溶性表达.用目前方法制备的抗血清特异性不高,如建立ALT1的免疫学检测方法需要采用特异性识别ALT1的抗体,以避免交叉反应引起的假性升高.