PCR法分子克隆及序列分析广西产眼镜王蛇蛇毒α-神经毒素基因

• 作者: 中村真理子 小杉忠诚 李其斌 渡庆次贺博 金城记代彦
• 来源期刊: 中华急诊医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 眼镜王蛇 α-神经毒素 PCR 基因序列
• 年，卷（期）: 2004,（2）
• 所属期刊栏目: 英文原著
• 页码范围: 77-80
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 1073字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:1671-0282.2004.02.001

摘要

目的为了获得眼镜王蛇(Ophiophagus hannah,Oh)蛇毒α-神经毒素(α-Neurotoxin, α-NT)的基因序列.方法我们通过比较了基因库中已知眼镜蛇科不同种类毒蛇来源的α-NT基因,发现它们有较高的同源性,特别是5'和3'非翻译区及引导肽部分高度保守,据此设计了包括翻译起始点的上游引物,以及为了得到3'端较完整非编码部分而设计了基本上属于d(T)的反意链下游RACE-PCR引物.为了克服引物所带来的模糊扩增,还在蛋白编码部分再设计一对上下游引物,由此组成P1、 P2、 P3和 P4四对引物.采用Nacleospin RNA Kit法分别从3条活Oh蛇毒腺中提取mRNA, 以3'端引物合成cDNA的第一链,并以此作为模板,分别用四对引物进行PCR扩增反应,得到了目的基因不同长度的PCR产物,产物经精制后进行测序,对比分析其结果.结果获得了全长474 bp的Oh.cDNA的基因核苷酸序列,包括5'端60 bp,信号肽伴启动子ATG 63 bp,蛋白质密码部分216 bp和3'端186 bp并含有TGA终止码.经基因库信息计算机分析其信号肽与眼镜蛇树属(Pseudonnaja textilis,Pt.)海蛇(Laticauda semifasciata,Ls)100%同源,96.8%与眼镜蛇南洋亚种(Naja sputatrix,Ns)和银环蛇(Bungarus multicinctus,Bm)同源.蛋白密码部分 83.3%与 Ns,79.2%与 Pt, 76.4%与 Ls和 74.1%与 Bm同源.氨基酸顺序分析信号肽后紧接着的72个氨基酸90.3%与已发现的眼镜王蛇毒长链α-NT Toxin a同源,大约 73.6% Toxin b 、69.7% Oh-4 、66.7% Oh-5 、56.9% Oh-6A 和6B同源,并与α-银环蛇毒素54.2%同源.结论新发现的Oh.cDNA属于长链α-NT的基因.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李其斌	中国广西医科大学第一附属医院急诊科蛇伤与中毒研究中心	1	1	1.0	1.0