抗端粒酶核酶质粒的构建筛选及其对CNE-2Z细胞增殖与凋亡的影响

• 作者: John R.Arrand 赵颖海 陈小毅
• 来源期刊: 癌症
• 学科: 医学
• 关键词: 鼻咽肿瘤 核酶 端粒酶 凋亡
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 50-55
• 页数: 6页
• 分类号: R739.63
• 字数: 4883字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-467X.2004.01.009

摘要

背景与目的:已证实端粒酶(telomerase,TLMA)对肿瘤的进展和肿瘤细胞的无限增殖起着重要的决定作用.核酶是具有特殊核酸内切酶活性的反义RNA,可序列特异性地与靶RNA分子配对并切割靶基因RNA.有报道人低分化鼻咽癌CNE-2Z细胞端粒酶阳性,本实验目的是构建抗端粒酶RNA模板区特异性核酶的真核表达载体并用电穿孔法将其导入人低分化鼻咽癌CNE-2Z细胞,研究该核酶对CNE-2Z细胞增殖、凋亡的影响.方法:设计合成针对端粒酶RNA模板区的锤头状核酶基因teloRZ作为端粒酶抑制剂,构建3种带有绿色荧光蛋白(greenfluorescent protein,GFP)报道基因和嘌呤霉素(puromycin)抗性基因的teloRZ真核表达质粒pGFPuro-teloRZ2.1、pGFPuro-teloRZ7.1、pGFPuro-teloRZ7.7,这3种质粒的不同点在于teloRZ基因和puromycin抗性基因按3种不同方向设计,然后将上述3种质粒及载体质粒pPAT-GFP电转染CNE-2Z细胞,用荧光显微镜检测GFP表达情况;用流式细胞仪、荧光染色法检测细胞增殖指数及凋亡等指标.结果:CNE-2ZGTR7.1细胞(转染目的基因质粒pGFPuro-teloRZ7.1的CNE-2Z细胞)增殖指数(25.100±0.141)%明显低于CNE-2Z细胞(未转染质粒的细胞)的(53.663±16.981)%、CNE-2ZG细胞(转染空载质粒pPAT-GFP的CNE-2Z细胞)的(61.575±5.166)%、CNE-2ZGTR2.1细胞(转染目的基因质粒pGFPuro-teloRZ2.1的CNE-2Z细胞)的(61.500±20.082)%和CNE-2ZGTR7.7细胞(转染目的基因质粒pGFPuro-teloRZ7.7的CNE-2Z细胞)的(59.400±13.933)%,差异有显著性(P＜0.01);CNE-2ZG、CNE-2ZGTR7.1、CNE-2ZGTR7.7细胞有GFP表达,而CNE-2Z、CNE-2ZGTR2.1细胞无GFP表达.从3种质粒中筛选出pGFPuro-teloRZ7.1做进一步的实验,发现CNE-2ZGTR7.1细胞传至第12代后有凋亡细胞出现,而CNE-2Z及CNE-2ZG细胞中无凋亡细胞.结论:端粒酶核酶基因teloRZ7.1的导入可使CNE-2Z细胞的增殖能力下降并可诱导CNE-2Z细胞凋亡.核酶TeloRZ7.1可望成为有效的端粒酶抑制剂.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈小毅	广东医学院病理学教研室	92	466	12.0	15.0
2	赵颖海	广东医学院病理学教研室	49	204	7.0	10.0