人神经营养素-3基因的克隆、表达及其活性检测

• 作者: 孙朝晖 谢佐平 赖燕来
• 来源期刊: 神经解剖学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 神经营养素-3 原核表达 亲合层析 真核表达 神经细胞
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 原著
• 页码范围: 7-11
• 页数: 5页
• 分类号: Q42
• 字数: 2980字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-7547.2004.01.002

摘要

为了获取神经营养素-3(NT-3)将之用于神经系统疾病的治疗,采用RT-PCR技术,从人胎脑组织特异性扩增并克隆了人NT-3全长以及成熟蛋白编码基因,将其分别克隆至表达载体pcDNA3.1与pET28a,构建了重组真核表达载体pcDNA3.1-NT3和重组原核表达载体pET28-NT3s.pcDNA3.1-NT3经脂质体介导转染至大鼠胚胎脑纹状体神经胶质细胞,以G418筛选出抗性阳性克隆,该克隆株与大鼠胚脑纹状体神经干细胞体外共培养5 d,MAP-2(微管相关蛋白2)免疫细胞化学反应结果显示,转染细胞株所表达的NT-3蛋白具有生物学活性,可促进共培养的纹状体神经干细胞的突起生长.将pET28-NT3s转化大肠杆菌,以IPTG诱导,获得了相对分子质量约18 kD的6XHis-NT3融合蛋白,其表达量占菌体总蛋白的20%左右.经镍柱亲和纯化,得到纯度达95%的rhNT-3蛋白,免疫印迹证实所获蛋白产品具有特异的免疫反应性.