抗人核内不均一核糖核蛋白A2/B1抗体可变区基因克隆、串联和表达

• 作者: 彭晓东 毕建虹 王霞 胡丽娟 黎光
• 来源期刊: 中华医学遗传学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 核内不均一核糖核蛋白A2/B1 抗体可变区基因 单链抗体 肺癌
• 年，卷（期）: 2004,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 548-551
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3028字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:1003-9406.2004.06.003

摘要

目的克隆抗人核内不均一核糖核蛋白A2/B1(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2/B1,HnRNPA2/B1)单克隆抗体的重链可变区(variable region of heavy chain, VH)和轻链可变区(variable region of light chain, VL)基因,构建抗HnRNPA2/B1单链抗体(single chain Fv,ScFv)基因,并在大肠杆菌表达.方法采用斑点ELISA、Western印迹和免疫组化检测抗HnRNPA2/B1单克隆抗体3E8的特异性,并通过逆转录-聚合酶链反应、重叠延伸PCR来克隆、串联VH和VL基因,构建抗HnRNPA2/B1 ScFv基因pET28(a+)表达载体,在大肠杆菌BL21中诱导表达,通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳、竞争抑制ELISA检测表达产物.结果 3E8抗体能特异性地与HnRNPA2/B1合成肽以及3株人肺癌细胞内HnRNPA2/B1结合;克隆的VH基因为345 bp,VL基因为309 bp,符合小鼠抗体可变区特性;抗HnRNPA2/B1 ScFv蛋白以包涵体形式表达,分子量约28 000,并具有与抗原结合活性.结论成功构建了抗HnRNPA2/B1 ScFv基因克隆,并在大肠杆菌中获得了功能性表达,为阐明HnRNPA2/B1与肺癌相关性奠定了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	彭晓东	华西医院临床免疫中心	1	3	1.0	1.0