小分子干扰RNA特异性抑制胃癌SGC7901细胞人端粒酶催化亚单位基因表达的研究

• 作者: 彭俊生 殷勤伟 汪建平 詹文华 马晋平 高劲松
• 来源期刊: 中华外科杂志
• 关键词: RNA干扰 RNA,小分子干扰 胃肿瘤 端粒酶催化亚单位 短发夹RNA
• 年，卷（期）: 2004,（22）
• 所属期刊栏目: 普通外科
• 页码范围: 1372-1376
• 页数: 5页
• 字数: 3886字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0529-5815.2004.22.007

摘要

目的构建针对人端粒酶催化亚单位(human telomerase catalytic subunit, hTERT)基因的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)表达载体pU6-hTERT-siRNAs,观察其对胃癌SGC7901细胞hTERT基因的特异性抑制作用.方法采用报告基因质粒pCX-GFP(5 510 bp)和含有鼠U6启动子pU6 (3 300 bp)质粒,设计合成针对绿色荧光蛋白(GFP)基因的发夹RNA(shRNA)序列,构建SHi-pU6-GFP质粒.应用LipofectamineTM2000将pCX-GFP质粒和SHi-pU6-GFP质粒转染K562细胞、SGC7901细胞,并用荧光显微镜观察转染效果.设计合成针对hTERT的siRNAs,构建重组pU6-hTERT-siRNAs质粒.LipofectamineTM2000介导pU6-hTERT-siRNAs质粒转染SGC7901细胞.分别应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)定性和定量检测hTERT基因表达情况.结果质粒pU6和SHi-pU6-GFP经EcoRⅤ和XbaⅠ酶切电泳后,前者出现3 300 bp和约300 bp条带,而后者出现3 300 bp和约350 bp条带,与实验设计的针对GFP的shRNA长度相符.说明本实验已成功构建了针对绿色荧光蛋白GFP基因的SHi-pU6-GFP质粒.K562细胞和SGC7901细胞中分别观察到转染pCX-GFP质粒和SHi-pU6-GFP质粒前后发绿色荧光的细胞数目明显减少.定性、定量检测SGC7901细胞转染pU6-hTERT-siRNAs组hTERT基因表达抑制.结论针对hTERT基因设计的siRNAs表达质粒可以特异性抑制SGC7901细胞hTERT基因表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高劲松	中山大学达安基因诊断中心	23	172	8.0	12.0