用绿色荧光蛋白监测转基因植物中选择标记基因的消除

• 作者: 吕玲飞 庞永奇 方荣祥 贾洪革 陈晓英
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 选择标记基因 转基因植物 绿色荧光蛋白
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 基因工程
• 页码范围: 10-15
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 5697字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2004.01.003

摘要

绿色荧光蛋白(GFP)可直接进行活体观察,它的这个优点可被用于监测转基因植物中选择标记基因的消除.为此,构建了植物表达载体pGNG,将绿色荧光蛋白基因(gfp)和卡那霉素抗性基因表达盒(NosP-nptII-NosT)一起克隆在两个同向的lox位点间,在第一个lox位点上游置有CaMV 35S启动子以驱动GFP表达,第二个lox位点下游置有不含启动子的大肠杆菌β-葡萄糖醛酸酶(GUS)基因.首先在含卡那霉素(Kan)的培养基上筛选出转pGNG的烟草,借助绿色荧光可容易地检出表达GFP的转化体.然后用另一转化载体pCambia1300-Cre二次转化表达GFP的转基因植物,利用另一选择标记基因-潮霉素抗性基因(hpt)进行筛选,在获得的再生植株中,Cre重组酶的表达消除了转化体中两lox位点间的gfp和nptII.实验结果表明可借助GFP荧光的消失,快速选出nptII被消除的二次转化体,同时GUS(作为目的蛋白) 在CaMV 35S启动子驱动下获得表达.最后利用后代的分离将hpt和cre除去.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	方荣祥	中国科学院微生物研究所植物生物技术实验室	26	340	9.0	18.0
2	陈晓英	中国科学院微生物研究所植物生物技术实验室	11	118	6.0	10.0
3	贾洪革	中国科学院微生物研究所植物生物技术实验室	3	63	3.0	3.0
4	吕玲飞	中国科学院微生物研究所植物生物技术实验室	1	20	1.0	1.0
8	庞永奇	中国科学院微生物研究所植物生物技术实验室	3	63	3.0	3.0