胃癌MG7-Ag模拟表位与HSP70融合基因疫苗的构建及其诱导小鼠免疫反应的研究

• 作者: 乔太东 吴开春 宁晓暄 徐立 时永全 李源 樊代明 陈宝军
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 胃肿瘤 疫苗,基因 热休克蛋白质类70 分子模拟
• 年，卷（期）: 2004,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 240-242
• 页数: 3页
• 分类号: R73-36+2
• 字数: 2967字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2004.03.014

摘要

目的以热休克蛋白70(HSP70)为载体,构建胃癌MG7-Ag模拟表位与HSP70融合基因的DNA疫苗,并观察该疫苗诱导C57BL/6小鼠产生MG7-Ag特异性免疫反应的作用.方法将胃癌MG7-Ag模拟表位(九肽)的编码序列设计在HSP70下游引物的5′末端,通过PCR方法获得HSP70与模拟表位的融合基因片段.将PCR产物克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+),构建融合基因疫苗.将该融合基因疫苗接种C57BL/6小鼠股四头肌,每隔3周加强免疫一次,共接种3次.分别在每次接种后3周收集免疫血清,用细胞ELISA法检测小鼠血清中抗MG7-Ag抗体的水平.末次免疫后3周,收集脾细胞,用51Cr释放法检测MG7-Ag特异性CTL的杀伤活性. 结果 PCR扩增得到大小约2.0kb的片段,与预期大小一致.将该片段克隆入pcDNA3.1(+),DNA序列测定证实MG7-Ag模拟表位的编码序列已成功融合于HSP70 cDNA的3′末端.基因疫苗免疫后,融合基因免疫组小鼠于第9周出现抗MG7-Ag抗体,而对照组小鼠无MG7-Ag抗体产生(P＜0.05).51Cr释放实验结果表明,融合基因免疫组小鼠脾细胞对靶细胞的杀伤率与对照组相比无显著差异(P>0.05).结论 MG7-Ag模拟表位与HSP70融合基因疫苗构建成功;该融合基因疫苗能够诱导MG7-Ag特异性的体液免疫反应.