副溶血性弧菌直接溶血相关毒素蛋白的纯化及性质初探

• 作者: 姜普林 曾年华 王志斌 王珊珊 聂军 肖红 苏建新 苏桂栋 黄佳亮
• 来源期刊: 华南预防医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 弧菌,副溶血性 直接溶血相关毒素
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 18-20
• 页数: 3页
• 分类号: Q939.1
• 字数: 2154字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-5039.2004.01.006

摘要

目的纯化副溶血性弧菌直接溶血相关毒素(TRH)蛋白,鉴定表达产物的生物学活性和免疫原性,为构建副溶血性弧菌快速检测方法奠定物质基础.方法构建trh基因的原核融合表达系统PRⅡ(trh/pGEX-3X/DE3),在31℃条件下0.6 mmol/L IPTG诱导表达.用SDS-PAGE分析蛋白表达,溶血试验检测表达蛋白的溶血活性.将表达产物皮下注射免疫兔,溶血抑制实验检测该抗体体外对TRH溶血活性的抑制作用.结果 PRⅡ在上述条件下诱导后,TRH呈可溶性、融合性表达.溶血试验表明,表达的蛋白具有溶血活性.用表达的蛋白免疫兔产生的相应抗体,在体外具有抑制TRH溶血活性的作用.结论 trh基因在原核融合表达系统pGEX-3X/DE3中获得成功表达,并得到纯度较高的TRH蛋白,为基因工程大规模制备高纯度TRH抗原、制备抗TRH的多克隆和(或)单克隆抗体、构建基因工程菌苗、阐明该菌的致病机制奠定了基础.