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摘要:
目的克隆人端粒酶催化亚单位(hTERT)的启动子,并检测它在多种人肺癌细胞株和人胚肺成纤维细胞株中的转录活性,为肺癌靶向性基因治疗的研究奠定基础.方法以人胚肾293细胞基因组DNA为模板,应用PCR方法克隆hTERT 5′端上游旁侧序列长约1.1kb的启动子片段,经DNA测序无误后克隆入荧光素酶报告质粒pGL3-Basic的荧光素酶基因上游,构建pGL3-hTERTp重组质粒,用脂质体法瞬时转染人肺癌细胞株A549、SPC-A-1、LTEPa-2、NCI-H446、YTMLC、GLC-82、A2,以及人胚肺成纤维细胞株MRC-5,转染48 h后检测hTERT启动子在各细胞株中的转录活性.结果琼脂糖凝胶电泳显示PCR克隆的hTERT启动子片段长约1.1kb.DNA测序结果与GenBank中hTERT启动子DNA序列完全一致,其5′端和3′端分别位于hTERT基因转录起始位点上游1 126 bp和43 bp,片段长度为1 084 bp.采用双酶切和PCR两种方法鉴定pGL3-hTERTp重组质粒,均显示构建成功.瞬时转染及荧光素酶活性检测实验显示,hTERT启动子在所检测的肺癌细胞株中均有高低不同的转录活性,而在MRC-5细胞株中无转录活性.结论该实验克隆的1 084 bp大小的hTERT启动子在多种肺癌细胞株中均有转录活性,在人胚肺成纤维细胞中无转录活性.hTERT启动子有可能作为调控元件用于肿瘤靶向性基因治疗.
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文献信息
篇名 人端粒酶催化亚单位(hTERT)启动子的克隆及其在人肺癌细胞中转录活性的研究
来源期刊 中国肺癌杂志 学科 医学
关键词 肺肿瘤 端粒酶催化亚单位(hTERT) 启动子 转录活性
年,卷(期) 2004,(6) 所属期刊栏目 基础研究
研究方向 页码范围 475-479
页数 5页 分类号 R734.2
字数 3898字 语种 中文
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研究主题发展历程
节点文献
肺肿瘤 端粒酶催化亚单位(hTERT) 启动子 转录活性
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
中国肺癌杂志
月刊
1009-3419
12-1395/R
大16开
天津市和平区南京路228号
62-95
1998
chi
出版文献量(篇)
3972
总下载数(次)
9
总被引数(次)
32899
相关基金
国家自然科学基金
英文译名:the National Natural Science Foundation of China
官方网址:http://www.nsfc.gov.cn/
项目类型:青年科学基金项目(面上项目)
学科类型:数理科学
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