二型谷氨酸羧肽酶口服基因疫苗的制备及其降低大鼠麻醉药用量的初步研究

• 作者: 姚勇 孔燕国 张振兴 张波 李桂林 栗世方 王任直 王欣 田士强 窦万臣
• 来源期刊: 中华医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 沙门氏菌菌苗 戊巴比妥 二型谷氨酸羧肽酶
• 年，卷（期）: 2004,（14）
• 所属期刊栏目: 基因诊断与治疗
• 页码范围: 1152-1156
• 页数: 5页
• 分类号: R4
• 字数: 4354字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0376-2491.2004.14.003

摘要

目的研制携带二型谷氨酸羧肽酶(GCP Ⅱ)的口服疫苗,探讨该疫苗对大鼠麻醉药用量的影响.方法采用聚合酶链反应、酶切连接和蓝白筛选的方法,构建GCP Ⅱ的表达载体;用磷酸钙共沉淀的方法转染HEK293细胞,G418筛选阳性细胞克隆;逆转录聚合酶链反应和免疫荧光细胞染色的方法鉴定阳性细胞株;氯化钙法制备携带GCP Ⅱ表达载体的减毒鼠伤寒沙门氏菌口服疫苗(SL-GCP Ⅱ);采用原代培养的巨噬细胞吞噬SL-GCP Ⅱ的方法,观察疫苗的体外表达情况;将50只雄性SD大鼠随机分为A、B 2组,每组25只,2组鼠的体重分别为(174 g±13 g)和(172 g±11 g),差异无显著意义(P=0.072).A组胃内灌注600 μL、OD2600.6 SL-GCP Ⅱ,两周内4次给药;B组为对照组,给予SL3261,剂量和方法与A组相同.采用免疫荧光的方法检测大鼠循环中GCP Ⅱ抗体滴度,观察麻醉药戊巴比妥钠的用量.结果扩增GCP Ⅱ基因并构建了含有GCP Ⅱ基因的表达载体--pCDNA3.1-GCP Ⅱ;建立了细胞株 HEK 293-GCPⅡ;体外实验证明培养的巨噬细胞吞噬SL-GCP Ⅱ后,能够有效表达GCP Ⅱ基因.体内实验发现口服疫苗能够激活22/25只SD大鼠产生GCP Ⅱ抗体,实验组麻醉药戊巴比妥钠的用量(36.9 mg/kg±1.6 mg/kg)显著低于对照组(40.8 mg/kg±1.4 mg/kg,P=0.00).结论成功研制了GCP Ⅱ的口服疫苗,它能够激活大鼠免疫反应,产生GCP Ⅱ抗体,并降低了大鼠麻醉药的用量.这种现象可能与疫苗能够减少脑内兴奋性氨基酸的生成有关.