重组人组织型纤溶酶原激活剂突变体基因的克隆、表达与生物活性鉴定

• 作者: 任启生 冯长根 宋新荣 陈熳
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 重组人组织型纤溶酶原激活剂突变体 克隆 表达 生物活性
• 年，卷（期）: 2004,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 6-8
• 页数: 3页
• 分类号: Q785
• 字数: 3185字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-311X.2004.05.004

摘要

目的:研究重组人组织型纤溶酶原激剂突变体(reteplase,r-PA)基因的克隆和表达,并对表达产物进行活性鉴定.方法:通过PCR的方法从t-PA基因上扩增得到r-PA基因的编码序列,并克隆到pUC19载体中,经DNA测序正确后,将该基因克隆到含有T7启动子的高效表达质粒pJZ-100中,转化E.coli BL21(DE3),得到含有r-PA基因的工程菌.工程菌经IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测表达情况.提取包涵体,经过体外稀释法复性,亲和色谱层析纯化,测定产物的活性.结果:表达的重组蛋白约占可溶性总蛋白的20%,复性并纯化后测定活性为58000IU/mg.结论:成功构建了重组r-PA的表达质粒,表达产物具有良好的生物活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	冯长根	北京理工大学新医药开发研究中心	342	5285	35.0	51.0
2	任启生		24	327	12.0	17.0
3	宋新荣		18	201	8.0	14.0
4	陈熳	北京理工大学新医药开发研究中心	1	5	1.0	1.0