小麦花粉管途径转化及高效筛选体系的建立

• 作者: 余桂红 刘春光 刘根齐 周淼平 孙勇如 陆维忠 马鸿翔 黄益洪
• 来源期刊: 分子植物育种
• 学科: 农学
• 关键词: 小麦 花粉管途径 转化 bar基因 筛选方法
• 年，卷（期）: 2004,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 777-782
• 页数: 6页
• 分类号: S33
• 字数: 4273字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-416X.2004.06.005

摘要

本文报道了一种从大量花粉管途径转化处理后代中快速有效地筛选到转基因植株的方法.转化质粒为含bar筛选标记基因的天麻抗真菌蛋白(GAFP)与兔防御素(NP-1)双价抗病基因植物表达载体(pBI35S-gafp-NP1-bar),受体小麦品种为扬麦158和Alondra.对花粉管途径转化处理获得的种子分3步进行筛选鉴定:首先,转化处理种子密播于塑料盘中,待小苗长到3叶期时,用浓度为120mg/L的Basta除草剂弥雾喷施筛选,约10d后绝大部分小苗变黄枯死,只有约1%的高抗Basta除草剂的T0小苗存活;然后对其Basta抗性植株用gafp基因引物进行PCR检测,其中62.5%的Basta抗性植株为PCR阳性;最后将T0代PCR阳性植株后代种子(T1)分别发芽并按株系混合取样提取DNA,分别用gafp和bar基因引物进行PCR检测验证,结果均为阳性.表明外源基因已整合入小麦基因组并由T0代植株稳定遗传到T1代,同时证明该筛选方法是可靠有效的.