增强型绿色荧光蛋白基因转染小鼠胚胎干细胞及其无血清神经细胞诱导

• 作者: 吴旋 唐军 徐海伟 曹娟 范晓棠 黎海蒂
• 来源期刊: 解剖学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 胚胎干细胞 神经前体细胞 绿色荧光蛋白 免疫细胞化学 小鼠
• 年，卷（期）: 2004,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 544-547
• 页数: 4页
• 分类号: Q813.1+1
• 字数: 2682字
• 语种: 英文
• DOI: 10.3321/j.issn:0529-1356.2004.05.023

摘要

目的构建表达绿色荧光蛋白的小鼠胚胎干细胞(MES)克隆,观察基因转染对MES细胞增殖和无血清诱导为nestin阳性神经前体细胞(NPCs)的影响.方法原代分离小鼠胚胎成纤维细胞并经丝裂霉素-C处理作为饲养层细胞.质粒的转化、抽提、纯化.电穿孔法基因转染,MES细胞克隆的NBT/BClP染色,NPCs的nestin免疫组织化学染色.结果 EGFP基因转染后可得到表达绿色荧光蛋白的MES细胞克隆,采用N2或ITSF无血清条件培养基可将其定向诱导为nestin阳性的并能发绿色荧光的NPCs.基因转染后的MES细胞增殖、神经前体细胞诱导率和未转染组相比均无明显下降,但NPCs绿色荧光的表达较诱导前明显下降.结论基因转染对ES细胞的增殖和神经分化无明显影响.