绿色荧光蛋白标记的D-氨基酸氧化酶基因在人宫颈癌细胞中的表达研究

• 作者: 何志颖 姚玉成 李文林 江千里 温丽敏 王健民 王新民 胡以平 陈元晓
• 来源期刊: 遗传学报
• 学科: 医学
• 关键词: 绿色荧光蛋白 D-氨基酸氧化酶 自杀基因 报告基因 基因表达
• 年，卷（期）: 2004,（11）
• 所属期刊栏目: 人类与医学遗传学
• 页码范围: 1175-1181
• 页数: 7页
• 分类号: R329.2
• 语种: 中文

摘要

为了探讨绿色荧光蛋白标记的红色酵母D-氨基酸氧化酶(DAAO)基因在人宫颈癌细胞(HeLa细胞)中的表达及其功能,采用基因重组技术构建了含有CMV启动子和EGFP、DAAO基因开放阅读框(ORF)的真核表达载体pIRES-DAAO.脂质体法转染HeLa细胞,荧光显微镜下观察转染细胞中绿色荧光蛋白的表达,流式细胞术分析转染效率并筛选荧光阳性细胞,命名为HeLa-D.以不同浓度的前药D-Ala处理HeLa-D细胞,MTT法检测细胞存活率.结果显示,荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白在HeLa-D细胞中表达,流式细胞术成功筛选出HeLa-D细胞.前药D-Ala能明显杀伤HeLa-D细胞.结果表明,EGFP可作为报告基因快速筛选DAAO表达载体转染的细胞,DAAO/D-Ala自杀基因系统可进一步用于肿瘤的基因治疗研究.