Vasostatin基因重组腺病毒载体的构建及其对胰腺癌生长的抑制作用

• 作者: 乔敏敏 卢健 李雷 章永平 袁耀宗
• 来源期刊: 肿瘤
• 学科: 医学
• 关键词: Vasostatin基因 基因治疗 遗传载体 胰腺肿瘤 异种移植模型抗肿瘤试验 小鼠,裸
• 年，卷（期）: 2004,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 538-541
• 页数: 4页
• 分类号: Q782|R456
• 字数: 3424字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3781/j.issn.1000-7431.2004.06.005

摘要

目的以复制缺陷型腺病毒为载体,构建vasostatin基因重组腺病毒,并观察其对胰腺癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用.方法以人肌肉cDNA文库为模板应用PCR的方法扩增出vasostatin的DNA片断,定向插入腺病毒穿梭质粒pshuttle-CMV经酶切、测序鉴定正确后,电穿孔法将重组穿梭质粒转化E. coli BJ5183-AdEasy-1感受态细菌,行细菌内同源重组.将抗性筛选和酶切鉴定正确的重组质粒pAd-CMV-vasostatin转染293细胞进行包装.病毒扩增纯化后,病毒感染人胰腺癌细胞,RT-PCR和Western印迹法检测vasostatin的表达状况.复制人胰腺癌裸鼠移植瘤模型,瘤内注射107pfu pAd-CMV-vasostatin、108pfu pAd-CMV-LacZ及PBS,观察移植瘤的生长曲线及瘤重.结果PCR产物电泳后可见长度为560bp左右的目的条带;酶切及测序鉴定表明穿梭质粒pshuttle-CMV中插入了vasostatin的DNA片断;卡那霉素抗性筛选及Pac Ⅰ酶切鉴定证实腺病毒重组质粒pAd-CMV-vasostatin构建成功;转染293细胞7天后观察到细胞病理学效应出现.PCR鉴定表明重组腺病毒中含有vasostatin片断.RT-PCR和Western印迹法证实vasostatin mRNA及蛋白的表达.治疗后3周pAd-CMV-vasostatin组移植瘤的体积及瘤重均显著小于pAd-CMV-LacZ组及PBS组.结论含有vasostatin基因的重组腺病毒构建成功,并可显著抑制人胰腺癌裸鼠移植瘤的生长.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	章永平	上海第二医科大学附属瑞金医院消化科	34	447	12.0	20.0
2	乔敏敏	上海第二医科大学附属瑞金医院消化科	41	622	14.0	24.0
3	袁耀宗	上海第二医科大学附属瑞金医院消化科	118	1850	23.0	39.0
4	卢健	上海第二医科大学人类基因治疗中心	15	99	6.0	9.0
5	李雷	上海第二医科大学附属瑞金医院消化科	6	98	4.0	6.0