Ⅰ型粘蛋白单链抗体的制备及其生物学活性的初步研究

• 作者: 刘春生 孔北华 曲迅 李鹏 王文霞 马道新 魏薇
• 来源期刊: 现代妇产科进展
• 学科: 医学
• 关键词: 基因工程抗体 粘蛋白类 酶联免疫吸附测定
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 34-37
• 页数: 4页
• 分类号: R730.54
• 字数: 3001字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-7379.2004.01.011

摘要

目的:制备Ⅰ型粘蛋白(MUC1)基因工程单链抗体(scFv),并对其生物学活性进行初步研究.方法:提取纯化MUC1单链抗体原核表达质粒C31,使用酶切和PCR鉴定;采用HBP标记的抗E Tag单克隆抗体进行Western blot,筛选表达量高的菌落,大量扩增后,制备培养上清及胞周质中抗MUC1 scFv;将MUC1高表达的SKOV3细胞铺于96孔板,戊二醛固定后作为包被抗原,将制备的抗MUC1 scFv抗体倍比稀释后利用ELISA方法检测其生物学活性.结果:质粒C31经Sfil酶切后为5308bp,经Sfil、Not Ⅰ双酶切后为4522bp和786bp,PCR扩增片段为1075bp.Western blot结果显示可溶性抗体为30kD.选择表达量高的菌落,进行大量扩增、诱导表达、提取培养液上清及胞周质可溶性抗体,胞周质抗体水平明显高于培养液上清;利用SKOV3作为包被抗原进行ELISA,当培养液上清1:32、胞周质1:2时所测OD值最高.结论:抗MUC1单链抗体表达于细菌的胞周质液和培养液上清,以胞周质液表达量最高;且制备的抗MUC1单链抗体有生物学活性.噬菌体表面呈现技术可大量制备人MUC1噬菌体基因工程单链抗体,可用于靶向治疗.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马道新		127	552	10.0	16.0
2	魏薇		12	77	5.0	8.0
3	孔北华		182	1320	19.0	26.0
4	李鹏		94	569	10.0	21.0
5	王文霞		13	37	4.0	5.0
6	刘春生		41	219	7.0	13.0
7	曲迅		95	471	12.0	15.0