抗CD20嵌合抗体片段F(ab′)2突变体在大肠杆菌中的高效分泌表达

• 作者: 刘银星 杨纯正 熊冬生 王金红 许元富 郑梦杰
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 嵌和抗体 发酵 CD20 凋亡 B细胞淋巴瘤
• 年，卷（期）: 2004,（5）
• 所属期刊栏目: 基因工程
• 页码范围: 673-678
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 字数: 5275字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2004.05.007

摘要

构建抗CD20嵌合抗体片段F(ab′)2突变体,研究其在大肠杆菌中的高效表达及其表达产物的生物学活性.采用PCR法构建抗CD20嵌合抗体片段F(ab′)2突变体,并用双脱氧终止法测定DNA序列;采用19L发酵罐高密度发酵抗CD20嵌合抗体片段F(ab′)2突变体,采用亲和色谱和分子筛色谱法纯化表达产物,并用SDS-PAGE和薄层激光扫描鉴定纯化产物;采用活细胞间接免疫荧光法测定纯化产物与靶细胞的结合活性;MTT法测定纯化产物对Raji细胞的生长抑制作用,并研究其作用机理.DNA序列测定结果表明,抗CD20嵌合抗体片段F(ab′)2突变体已成功构建,表达可溶性产物的产量达360 mg/L,具有与Raji细胞(CD20+)结合的活性,并抑制Raji细胞的生长,其作用机理为诱导Raji细胞凋亡.此突变体有望成为治疗非何杰金氏B细胞淋巴瘤的药物.