FasL基因转染Hela细胞体外诱导淋巴细胞凋亡的作用

• 作者: 刘伟 刘德莉 吴娟娟 曹谊林 殷德民 路丽明 陈炜
• 来源期刊: 上海第二医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: FasL基因 基因转染 细胞凋亡 Hela细胞
• 年，卷（期）: 2004,（4）
• 所属期刊栏目: 皮肤组织工程
• 页码范围: 279-283
• 页数: 5页
• 分类号: Q813.5|R322.99
• 字数: 3950字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-8115.2004.04.014

摘要

目的应用FasL基因转染具有上皮细胞特性的Hela细胞,探讨FasL基因的表达对诱导同种异体淋巴细胞凋亡的作用,为解决同种异体组织工程化皮肤的免疫排斥问题提供一条研究途径.方法 PLNCX2-FasL质粒转化大肠杆菌,抽提纯化的PLNCX2-FasL质粒用限制性内切酶Xho I,Not I酶切,琼脂糖凝胶电泳得到755 bp大小的目的条带.紫外灯下切割回收目的条带并抽提纯化得到FasL基因,用Xho I,NotI酶切PCDNA3.1质粒载体并在相同位点插入FasL基因,T4酶连接,构建PCDNA3.1-FasL重组质粒.脂质体转染法将PCDNA3.1-FasL基因转染Hela细胞,G418筛选;经过免疫细胞化学法,RT-PCR鉴定后,进行单项淋巴细胞混合试验,检测FasL基因对诱导淋巴细胞凋亡的作用.结果表达FasL基因的Hela细胞的淋巴细胞刺激指数较对照组转染空白质粒的Hela细胞下调,仅达到对照组刺激指数的17.01%.结论 FasL基因转染上皮细胞可诱导淋巴细胞凋亡,为研究避免同种异体组织工程化皮肤的免疫排斥提供了一种可行的方法和设想.