鸡柔嫩艾美耳球虫疫苗候选基因在大肠杆菌中的表达

• 作者: 尹继刚 张伟信 张西臣 李建华 杨举 田宗成 秦睿玲
• 来源期刊: 中国寄生虫病防治杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 柔嫩艾美耳球虫GZ株 大肠杆菌 表达 Western blotting
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 49-52
• 页数: 4页
• 分类号: R382
• 字数: 4391字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-5234.2004.01.015

摘要

目的构建柔嫩艾美耳球虫子孢子表面抗原原核表达载体,并且在大肠杆菌中表达. 方法将本室构建的pMD-Mz5-7克隆质粒酶切回收目的片段定向亚克隆到pET-28b(+)载体上,构建成原核表达载体pET-28b-Mz5-7,酶切鉴定正确后,在Escherichia coli BL21(DE3)中用IPTG诱导表达,并经SDS-PAGE 及Western blotting 鉴定. 结果成功构建了目的抗原基因的原核重组表达质粒pET-28b-Mz5-7,IPTG诱导表达该融合蛋白,SDS-PAGE电泳表明,其能表达一分子质量约为37 ku的融合蛋白,与预测分子质量相符,最佳反应条件为1 mol/L IPTG诱导4 h后表达量最高.薄层扫描显示表达的融合蛋白占菌体蛋白总量的18%,Western blotting结果显示,表达产物可被抗柔嫩艾美尔球虫的多克隆抗体识别,说明该融合蛋白具有很好的反应原性. 结论在原核细胞融合表达Mz5-7成功,为鸡球虫病重组苗的研究奠定了基础.