黑色素皮质素受体激动剂的高通量筛选模型研究

• 作者: 欧阳克清 胡应和 蔡绍皙 许治良 郑旭煦 高虹
• 来源期刊: 生物化学与生物物理进展
• 学科: 医学
• 关键词: 黑色素皮质素受体(MC4R),报告基因,激动剂,高通量筛选
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 36-40
• 页数: 5页
• 分类号: R965
• 字数: 3477字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3282.2004.01.004

摘要

为了建立黑色素皮质素受体(MC4R)激动剂的高通量筛选方法,将人的MC4R基因质粒(hMC4R/pCDNA3.1)与报告基因质粒(3×CRE/3×MRE/SRE-LUC)按1∶ 5的比例共转染到HEK293细胞,通过G418筛选,建立了稳定的MC4R激动剂筛选细胞株.利用MC4R内源激动剂α-MSH探索和优化了每孔接种细胞数目、激动剂孵育时间、溶剂DMSO终浓度、荧光素酶底物浓度等筛选条件,建立了可靠的筛选方法.实验表明:当细胞数目为4×104个/孔,激动剂孵育时间为8 h,每孔DMSO终浓度小于1%和α-MSH终浓度为1 μmol/L时,系统Z'-因子接近0.7,能够用于MC4R激动剂的高通量筛选.