人线粒体tRNALeu(UUR)基因氧化损伤与修复研究

• 作者: 汪振诚 焦炳华 王学敏 缪明永
• 来源期刊: 生物化学与生物物理进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 线粒体DNA,tRNALeu(UUR),突变,人线粒体亮氨酰tRNA合成酶,A3243G,体外转录,基因表达
• 年，卷（期）: 2004,（10）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 887-894
• 页数: 8页
• 分类号: Q522+.1
• 字数: 6782字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3282.2004.10.006

摘要

人mtDNA比核DNA更易受到自由基的氧化损伤,这些损伤可以被线粒体内的DNA修复机制所修复,损伤与修复是决定突变是否产生的两个重要因素.为了确定氧化损伤与损伤后修复对mtDNA突变的具体影响,采用四氧嘧啶处理LO2细胞,这种试剂进入细胞后,经氧化还原反应生成的自由基与线粒体自身代谢产生的自由基类似,然后观察自由基对细胞mtDNA的氧化损伤与损伤后DNA修复的动力学变化.由于线粒体的正常功能为修复机制所必需,采用MTT细胞活力实验检测不同浓度四氧嘧啶处理下线粒体酶活力,发现9 mmol/L四氧嘧啶培养细胞1h后,线粒体琥珀酸脱氢酶功能在撤去药物后0,2,8和24 h时间点均无明显变化.提取各组细胞的mtDNA,用EndoⅢ和Fgp两种酶切除受氧化损伤的核苷酸,然后用碱性琼脂糖凝胶电泳分离大小不等的mtDNA,进行DNA印迹实验,地高辛-抗体-碱性磷酸酶系统显色,检测完整与断裂的mtDNA量,利用Poisson公式(s=-lnP0/P,P0为未断裂链光密度值,P为所有链光密度值总和)计算一个mtDNA分子的平均损伤频率,结果显示,9 mmol/L四氧嘧啶处理细胞1 h,链平均损伤频率由对照的0.11个/分子增加至5.60个/分子,明显增加了mtDNA上核苷酸的氧化损伤,除去药物后8 h,绝大部分损伤可被修复,损伤频率减至0.40个/分子,除去药物后24h核苷酸的氧化损伤恢复至正常水平.采用接头介导PCR(LM-PCR)检测MTTL1基因区域内单个核苷酸的损伤与修复动力学.这种方法可以检测各组mtDNA上MTTL1基因75 bp区域内单个核苷酸损伤的部位及频率.结果显示,人MTTL1基因存在20个易受氧化损伤的核苷酸热点,经与相应区域内文献报道的16个突变热点比较,有12个热点部位重合,而修复未显示热点部位或区域.结果提示,自由基对核苷酸的选择性氧化损伤是决定mtDNA点突变发生及发生部位的主要原因.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	缪明永	第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室	81	514	11.0	18.0
2	王学敏	第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室	40	401	12.0	18.0
3	焦炳华	第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室	215	1714	20.0	33.0
4	汪振诚	第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室	8	81	4.0	8.0