乙型肝炎病毒S基因在毕赤酵母中的表达及在乙型肝炎病毒表面抗体检测中的应用

• 作者: 吴宗华 朱振宇 李林 洪国强 胡波
• 来源期刊: 中华检验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝炎表面抗原,乙型 基因表达 毕赤酵母 酶联免疫吸附测定
• 年，卷（期）: 2004,（6）
• 所属期刊栏目: 临床实验诊断研究
• 页码范围: 371-374
• 页数: 4页
• 分类号: R5
• 字数: 3934字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:1009-9158.2004.06.014

摘要

目的构建含有乙型肝炎病毒S基因的表达载体,在毕赤酵母中表达出高免疫反应性的重组乙型肝炎表面抗原(HBsAg)S蛋白,用以制备乙型肝炎表面抗体(HBsAb)酶免试剂盒.方法采用聚合酶链反应从含乙型肝炎病毒全基因序列(adw)的质粒PHBV1中扩增出S基因,并将其插入pPICZB质粒.携带有S片段的pPICZB质粒转化毕赤酵母菌株KM71H,甲醇诱导重组酵母细胞表达S蛋白.表达产物包被聚丙乙烯反应板,用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测HBsAb. 结果酶切电泳及DNA测序证实乙型肝炎病毒S基因已正确克隆到表达载体中;聚丙烯酰胺凝胶电泳显示HBsAg在毕赤酵母中表达;表达量约占总蛋白的25%～35%.表达产物用ELISA测定效价达1∶25 600;Western blot显示与正常人血清无交叉反应;用纯化产物作为包被抗原对卫生部临床检验中心HBsAb质控物及血清标本进行检测,灵敏度达10 mIu/ml,特异性达100%,重复性及线性良好,与国产商品试剂检测结果一致. 结论毕赤酵母表达系统高效表达出具有良好免疫反应性和特异性的HBsAg,可用于基因工程原材料的HBsAb酶免试剂盒的研制.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱振宇	中山大学北校区生化教研室	51	397	8.0	18.0