Staurosporine诱导小鼠心肌细胞凋亡模型的构建

• 作者: 李源 王晓明 臧益民 高峰 龚卫琴
• 来源期刊: 心脏杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 心肌细胞,小鼠 细胞凋亡 staurosporine caspase-3 乳酸脱氢酶
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 4-10
• 页数: 7页
• 分类号: Q255|R363.13
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-7236.2004.01.002

摘要

目的:Staurosporine可诱导不同细胞类型的细胞凋亡,但尚缺乏其对小鼠心肌细胞作用影响的报道.本研究旨在观察Staurosporine是否也可引起小鼠心肌细胞的凋亡,并对其模型进行分子水平的鉴定.方法:用Staurosporine处理原代培养的小鼠心肌细胞的直接刺激后,观察心肌细胞的形态学变化、DNA片段、半胱天冬蛋白酶(caspase)-3活性、细胞存活率以及细胞膜完整性.结果:①Staurosporine处理过的心肌细胞具有明显的凋亡形态学特征:细胞的皱缩、核的浓缩及DNA梯改变.② Staurosporine 4μmol/L对心肌细胞作用8 h后,与正常对照组比较细胞存活率降至31.2% (与对照组比,P<0.01), 且细胞存活率与Staurosporine的作用浓度和作用时间呈依赖关系;同时测定细胞培养液中能反映细胞膜完整性的胞浆内容物乳酸脱氢酶(LDH)水平,发现在Staurosporine作用1～8 h的各个时间点,LDH的漏出水平最高未超过10%(与对照组相比,P>0.05);这种高的细胞死亡率与低的细胞膜的损伤率,恰恰反映了细胞死亡的性质是凋亡性死亡.③Staurosporine能激活心肌细胞内的Caspese-3的活性,当使用广谱的Caspese抑制剂ZVAD-fmk预处理培养的小鼠心肌细胞后,能够有效的阻止上述细胞凋亡的发生,从而避免了Staurosporine诱导的细胞死亡.结论:staurosporine能够快速、有效的诱导小鼠心肌细胞凋亡,caspase-3在诱导的细胞凋亡过程中起着至关重要的作用.