抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体对噬菌体随机12肽库的免疫筛选

• 作者: 施为 谢红付 陈翔 龙剑
• 来源期刊: 中华皮肤科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肿瘤坏死因子 肽库 细菌噬菌体M13
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 35-37
• 页数: 3页
• 分类号: R73
• 字数: 3013字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:0412-4030.2004.01.013

摘要

目的从噬菌体随机多肽库中筛选出能与肿瘤坏死因子--α特异性结合的短肽分子.方法采用肿瘤坏死因子-α作为配基,免疫亲和筛选以融合蛋白形式在丝状噬菌体M13外壳蛋白Ⅲ表达的随机12肽文库,按"吸附-洗脱-扩增"的淘洗过程,经过3轮免疫筛选后,随机挑取噬菌体克隆用双抗体夹心ELISA及斑点ELISA测其特异性,并用混合的阳性噬菌体克隆分别与SLE患者和正常人血清反应,以斑点ELISA法分析其诊断系统性红斑狼疮的价值.结果经过3轮免疫筛选,特异性结合的阳性噬菌体克隆富集增加近100倍,第3轮筛选后随机挑选7个阳性噬菌体克隆,经双抗体夹心ELISA和斑点ELISA检测,有5个克隆能与肿瘤坏死因子α特异性相结合,其中A值最高的5个克隆混合后与SLE患者血清结合率明显高于正常人,差异有显著性.结论噬菌体随机肽库技术可以应用于分析、鉴定肿瘤坏死因子α的表位,继而为获得亚单位表位水平的诊断试剂和抗肿瘤坏死因子α的短肽疫苗提供依据.