膜表达热休克蛋白70真核表达载体的构建及其对肿瘤细胞的转染

• 作者: 余海 李达 杨关根 沈芬平 王青青 黄常新
• 来源期刊: 浙江医学
• 关键词: 膜表达 热休克蛋白70 载体构建 黑色素瘤细胞
• 年，卷（期）: 2004,（10）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 735-738
• 页数: 4页
• 字数: 4222字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-2785.2004.10.007

摘要

目的构建普遍适合性的膜表达热休克蛋白70(HSP70)的真核表达载体,修饰并建立HSP 70表达并结合在细胞膜表面的肿瘤细胞.方法RT-PCR法从人胚肾中获取HSP 70的cDNA,扩增成带酶切位点的目的基因.选择载体pDisplay,将目的基因插入载体多克隆酶位点中.DNA测序证实后,以脂质体转染的方法,将载体转染到黑色素瘤细胞.用G418抗性筛选获得阳性克隆.结果酶切电泳和DNA测序证实载体构建正确;目的基因的上游带信号肽序列,下游带跨膜序列.RT-PCR产物电泳、Westem Blotting、激光共聚焦显微镜和流式细胞术证实大量HSP 70表达并结合在转染的黑色素瘤细胞膜表面.结论成功地构建了膜表达HSP 70的真核表达载体;转染到黑色素瘤细胞后,细胞膜表面表达丰富的HSP70.转染细胞可以进一步制备新型瘤苗.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	余海	浙江大学医学院	47	376	11.0	17.0
2	王青青	浙江大学医学院	97	786	15.0	24.0
3	杨关根		74	501	11.0	19.0
4	黄常新		13	63	5.0	7.0
5	李达	浙江大学医学院	20	135	6.0	10.0
6	沈芬平	浙江大学医学院	12	77	5.0	8.0