成人骨髓间充质干细胞的体外培养和表型鉴定

• 作者: 刘伟 崔磊 曹谊林 李东 柳向东 柴冈
• 来源期刊: 上海第二医科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 骨髓 间充质干细胞 细胞培养 组织工程
• 年，卷（期）: 2004,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 302-306
• 页数: 5页
• 分类号: Q813.12
• 字数: 4299字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-8115.2004.04.020

摘要

目的建立成人骨髓间充质干细胞(hMSCs)的分离培养方法,并对其表面标志进行检测,研究骨髓间质干细胞(MSC)基本生物学特性.方法采用Percoll(1.073 g/mL)梯度离心分离hMSCs,体外扩增,流式细胞仪检测hMSCs表面抗原表达.结果成人骨髓间质干细胞在体外扩增原代及传代培养显示,hMSCs具有活跃增殖的能力,每10 mL骨髓可获得(1.25±0.56)×106个原代细胞,7代可获得(5.32±1.15)×1010个细胞(n=5),随着传代次数的增加,细胞的增殖能力下降.流式细胞仪检测生长良好的第3代hMSC显示CD29、CD44、CD106、CD105、CD166、HLA-A/B/C表达阳性,CD34、CD45、CD14、CD31、CD49d、CD54、HLA-DR/DP/DQ表达为阴性.细胞周期分析显示,hMSCs中,S+G2+M期的细胞约占(16.25±3.18)%,其中S期为(4.12±2.35)%;而处于G0+G1期的细胞总数占(76.35±5.28)%,说明大部分细胞仍然处于静止期.流式细胞仪检测表明分离的hMSCs具有间充质干细胞的特征.结论 hMSCs有很强的自我更新能力,在体外传代培养可维持良好的干细胞生物学特性,为进一步深入研究hMSCs作为组织工程种子细胞的应用提供参数.