乙酰胆碱酯酶基因重组腺病毒的构建及其对猫食管平滑肌细胞的影响

• 作者: 宁守斌 张忠兵 徐恩斌 林勇 蔡洪培 谢渭芬
• 来源期刊: 世界华人消化杂志
• 学科: 医学
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 117-120
• 页数: 4页
• 分类号: R57
• 字数: 3756字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-3079.2004.01.030

摘要

目的:利用AdEasy系统构建乙酰胆碱酯酶催化亚单位(AChET)重组腺病毒(AdAChET),并观察其对平滑肌细胞的影响.方法:将质粒pEFbos/AChET扩增、酶切获得AChET cDNA片段插入腺病毒穿梭载体质粒pAdTrack-CMV的巨细胞病毒(CMV)启动子下游,构建重组穿梭载体pAdTrack-CMV-AChET,线性化后与骨架载体AdEasy-1在细菌BJ5183内同源重组得到腺病毒质粒pAd AChET,经293细胞包装后得到复制缺陷型重组腺病毒Ad AChET;将AdAChET体外感染猫平滑肌细胞,以RT-PCR检测AChET在平滑肌细胞的表达;同时测定胆碱酯酶活力.结果:连接、重组后通过酶切和测序法筛选出pAd AChET;经293细胞包装,3 d后观察到绿色荧光蛋白(GFP)明显表达,氯化铯梯度离心纯化最终获得约4×1013efu/L滴度的重组病毒;Ad AChET体外感染平滑肌细胞3 d后,AChET表达明显增加,乙酰胆碱酯酶活力较Ad GFP感染组和阴性对照组明显增加(0.546±0.048 vs 0.495±0.039,0.546±0.048 vs 0.501±0.037)(P均＜0.01).结论:利用新型腺病毒载体AdEasy系统可在短期内制备同时表达GFP和AChET的重组腺病毒Ad AChET;Ad AChET体外感染平滑肌细胞可显著提高AChET的表达,这将为基因治疗贲门失弛缓症提供新的手段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	林勇	中国人民解放军第二军医大学长征医院消化内科	26	243	8.0	15.0
2	宁守斌	中国人民解放军第二军医大学长征医院消化内科	30	129	7.0	10.0
3	谢渭芬	中国人民解放军第二军医大学长征医院消化内科	12	97	5.0	9.0
4	张忠兵	中国人民解放军第二军医大学长征医院消化内科	7	25	4.0	4.0
5	徐恩斌	中国人民解放军第二军医大学长征医院消化内科	3	11	2.0	3.0
6	蔡洪培	中国人民解放军第二军医大学长征医院消化内科	2	5	1.0	2.0